動(dòng)物細胞多數需要微堿性環(huán)境,pH約為7.2~7.4,以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統對于維持培養基的pH是至關(guān)重要的,動(dòng)物培養基的pH是通過(guò)模擬血漿中天然存在的
CO2/NaHCO3(實(shí)際是CO32-/HCO3-)系統來(lái)控制的。配置動(dòng)物培養基時(shí),會(huì )將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養基。
一方面,由于NaHCO3不穩定,易分解產(chǎn)CO2,CO2從培養液中游離到空氣中,會(huì )使培養液pH升高;另一方面,細胞呼吸產(chǎn)生的CO2以及代謝產(chǎn)生的酸性代謝產(chǎn)物,又使pH降低。
在培養開(kāi)始的一段時(shí)間,細胞較少,呼吸產(chǎn)生的CO2較少,前者作用大于后者,培養液中pH可能會(huì )明顯上升,這就需要培養箱中補充一定量的CO2來(lái)維持pH;而后期隨著(zhù)細胞數目增多,細胞產(chǎn)生CO2增加,后者作用便大于前者,此時(shí),培養基中pH可能會(huì )明顯降低,盡管大多動(dòng)物細胞耐酸能力比耐堿能力略強一些,但如果超過(guò)警戒值,則需要更換培養基進(jìn)行傳代。
培養液中一般加入酚紅作為pH指示劑,所以此培養基中顏色變化是:櫻桃紅色→粉紅色→黃色。如果使用培養基之前,先通入CO2,或在CO2培養箱內進(jìn)行開(kāi)放式培養,則培養基顏色變化是:櫻桃紅色→黃色。如果培養基變黃,則需要及時(shí)更換培養基。
培養箱中CO2濃度應與培養液中NaHCO3濃度相平衡,如果培養箱中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3的加入量應為1.97 g/L;如果CO2濃度維持在10%,則NaHCO3的加入量應為3.95 g/L。
動(dòng)物細胞對pH變化比較敏感,但植物細胞就沒(méi)那么嬌弱了,培養過(guò)程中pH的變化幅度只要別太大,對它并不會(huì )造成明顯損傷。
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